🔬 ЛАБОРАТОРНИЙ СКРИНІНГ МАРКЕРІВ TTI
Протоколи серологічного та молекулярного аналізу трансфузійно-трансмісивних інфекцій (Стандарти AABB / EDQM Guide)
📋 СТРАТЕГІЯ СЕРОЛОГІЧНОГО ТА МОЛЕКУЛЯРНОГО ТЕСТУВАННЯ
1. Первинний скринінг (Screening Assays)
Мета: Максимальна чутливість (~99.9%) для повного виключення ризиків. Паралельний комбінований аналіз (Серологія + Скринінговий NAT/ПЛР).
2. Підтверджувальне тестування (Confirmatory Assays)
Мета: Максимальна специфічність (>99.9%). Дискримінаційний та кількісний ПЛР/NAT аналіз для остаточної верифікації та виключення хибнопозитивних реакцій.
🧬 ПРОТОКОЛИ ОЦІНКИ СПЕЦИФІЧНИХ БІОМАРКЕРІВ
Human Immunodeficiency Virus (Type 1, 2)
| Скринінговий маркер | Метод детекції | Клінічний регламент первинного етапу |
|---|---|---|
| HIV 1/2 Ab / Ag p24 | Автоматизований ІХЛ / ІФА (4-5 покоління) | Первинний імунохімічний скринінг сироватки. Виявляє антитіла та капсидний антиген. |
| HIV-1/2 RNA (Скринінговий пул) | MP-NAT (Minipool ПЛР) | Молекулярний скринінг. Тестування об’єднаних зразків (пулів) для масового виявлення РНК вірусу на ранніх етапах «періоду вікна» (від 5-11 днів). |
Hepatitis B Virus (Гепатит B)
| Скринінговий маркер | Метод детекції | Клінічний регламент первинного етапу |
|---|---|---|
| HBsAg (Поверхневий антиген) | Електрохемілюмінесценція (ECLIA) | Серологічний маркер для первинного масового відсікання позитивних зразків. |
| HBV DNA (Скринінговий пул) | MP-NAT / ID-NAT (ПЛР скринінг) | Молекулярний скринінг. Дозволяє виявити ДНК вірусу при прихованих формах (OBI), коли HBsAg негативний, але кров уже є трансмісивно небезпечною. |
Hepatitis C Virus (Гепатит C)
| Скринінговий маркер | Метод детекції | Клінічний регламент первинного етапу |
|---|---|---|
| Anti-HCV (Сумарні антитіла) | ІФА / ІХЛ (Тест-системи 4 покоління) | Первинний імунохімічний скринінг. Має тривале серологічне вікно (~70 діб). |
| HCV RNA (Скринінговий пул) | MP-NAT (Transcription-Mediated Amplification / ПЛР) | Молекулярний скринінг. Паралельний аналіз пулів плазми, який скорочує вікно детекції РНК вірусу до 1-2 тижнів після зараження. |
Treponema pallidum (Сифіліс)
| Скринінговий маркер | Метод детекції | Клінічний регламент первинного етапу |
|---|---|---|
| Антитіла IgG / IgM | Автоматизований трепонемний ІХЛ / ІФА тест | Скринінг специфічних сумарних антитіл на автоматичних аналізаторах. |
🧫 ВІЗУАЛІЗАЦІЯ ІМУНОФЕРМЕНТНОГО ПЛАНШЕТА (ELISA ANALYSES)
Модель 96-лункового планшета: Колірна інтерпретація реактивності скринінгових маркерів TTI за рівнем оптичної щільності (O.D.)
🔬 Оцінка результатів спектрофотометрії:
Вимірювання оптичної щільності (Optical Density) проводиться на довжині хвилі 450 нм. Зразки з коефіцієнтом O.D., що перевищує розраховане значення Cut-off, класифікуються як первинно-реактивні (позитивні) та підлягають вилученню з пулу заготівлі та повторній верифікації методами індивідуального NAT-ПЛР аналізу.
🧬 МОЛЕКУЛЯРНИЙ СКРИНІНГ ДОНОРІВ ЦІЛЬНОЇ КРОВІ
Візуалізація кінетики ампліфікації ПЛР (Real-Time PCR) та технології ID-NAT для безпеки клітинних компонентів
Зразки донацій цільної крові
Молекулярна верифікація
Результат: Автоматизована ПЛР-система виявила генетичний матеріал вірусу у Зразку #03. Вся заготовлена цільна кров цього донора (еритроцитарна маса та тромбоцити) миттєво відбраковується в базі даних та вилучається з ланцюжка постачання до лікарень.
🔬 ВЕРИФІКАТОР ІМУННОГО СТАТУСУ ДОНОРА
Протокол інтерпретації розбіжностей між серологічним скринінгом (Ab/Ag) та молекулярною детекцією (NAT/ПЛР) згідно з критеріями AABB
📊 МІЖНАРОДНЕ ПОРІВНЯННЯ ПЛР-ПРОТОКОЛІВ TTI (ЦІЛЬНА КРОВ)
Професійний аналіз стратегій молекулярної детекції та верифікації інфекцій за стандартами FDA (США) та PEI (Німеччина)
| 🔬 Параметр первинного NAT | 🇺🇸 США (Стандарти FDA) | 🇩🇪 Німеччина (Стандарти PEI) |
|---|---|---|
| Базова стратегія скринінгу | Minipool NAT (MP6 / MP16) Автоматизоване ПЛР-тестування об’єднаних зразків від 6 до 16 донорів цільної крові (платформи Roche/Grifols). |
Individual NAT (ID-NAT) Пріоритетне індивідуальне ПЛР-тестування кожної окремої донації цільної крові (без розведення у пулах). |
| Обов’язкові ПЛР-маркери | HIV-1/2 RNA, HBV DNA, HCV RNA, West Nile Virus (WNV) RNA, Babesia DNA (регіональний скринінг). | HIV-1/2 RNA, HBV DNA, HCV RNA, HEV RNA (Гепатит E), HAV RNA (Гепатит A), Parvovirus B19 DNA. |
| Поріг чутливості (LOD) | Оптимізований для пулів (у межах 100-200 МО/мл на загальну суміш). | Ультрависокий (вимагає детекції до 5-10 МО/мл для індивідуального зразка для виявлення наднизького навантаження). |
| Діагностична логіка | Спрямована на максимальну пропускну здатність лабораторії та економію тест-систем при масовому потоці цільної крові. | Спрямована на прецизійну безпеку: повне виключення ризику пропуску початкової реплікації вірусу на стадії “серологічного вікна”. |
🧪 АВТОМАТИЗОВАНЕ ПУЛЮВАННЯ MINIPOOL NAT (СТАНДАРТ MP6)
Протокол паралельного ПЛР-скринінгу донорів цільної крові: етапи консолідації аліквот та роздільної верифікації (Resolution)
1. Первинні аліквоти (ID)
2. Скринінг пулу MP6
📋 Протокол Resolution (Депулювання):
- ПЛР-ампліфікатор зафіксував перетин лінії порогу (Threshold) пулом MP6-A7.
- Компоненти цільної крові всіх 6 донорів автоматично закриваються на карантин в ІТ-системі.
- Запускається ID-NAT — індивідуальне ПЛР-тестування кожної з 6 первинних пробірок.
- Результат: Донор #03 верифікується як істинно позитивний. Його кров списується на утилізацію. Решта 5 донорів визнаються чистими та розблокуються для видачі.
🔬 Аналітичні критерії та ефект розведення (Dilution Effect):
При формуванні пулу MP6 концентрація вірусних копій у суміші падає в 6 разів порівняно з вихідною пробіркою донора. Тому міжнародні стандарти FDA вимагають від скринінгових ПЛР-систем наднизької межі детекції (LOD — Limit of Detection) — не більше 5-15 МО/мл для індивідуальних маркерів РНК HIV/HCV, що гарантує виявлення патогенів навіть у розведеному пулі.